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Contents : Electron J Biomed 2010 1:9. Daniele y col. MUTACI N Phe-809... ISSN: 1697-090X Inicio Home Indice del volumen Volume index B SQUEDA DE LA MUTACI N Phe-809 EN EL GEN DEL SUSTRATO DEL RECEPTOR DE INSULINA -1 (IRS-1) EN RATAS DIAB TICAS eSS Stella Maris Daniele PhD.1 Silvana Marisa Montenegro PhD.2-3 Mar a Cristina Tarr s PhD.2-3 Stella Maris Mart nez PhD 2 3. Comit Editorial Editorial Board Comit Cient fico Scientific Committee 1Facultad Normas para los autores Instruction to Authors de Ciencias Bioqu micas 2Facultad de Ciencias M dicas 3Consejo de Investigaciones. Universidad Nacional de Rosario. Rosario Argentina smartinez948 @ yahoo.com.mx Derechos de autor Copyright Contacto/Contact: Rev Electron Biomed / Electron J Biomed 2010 1:9-15. Comentario del revisor Prof. Pilar Mu iz Rodr guez. Titular del rea de Bioqu mica y Biolog a Molecular de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Burgos. Espa a PhD. Comentario del revisor Mar a Jes s Coma MD PhD. Head of Research Unit. Complejo Asistencial Universitario de Burgos. Espa a RESUMEN El gen del sustrato del receptor de insulina IRS-1 juega un rol clave en la transducci n de se ales de insulina en m sculo esquel tico. Diversos polimorfismos del gen IRS-1 han sido reportados en estados de insulinorresistencia como obesidad y diabetes tipo 2. Las ratas eSS desarrollan espont neamente diabetes tipo 2 magra con insulinoresistencia caracterizada por hiperglucemia e hiperinsulinemia. Durante el segundo a o existe disminuci n progresiva de la insulinemia y agravamiento del s ndrome. Nuestro prop sito fue buscar la mutaci n Phe-809 en el gen IRS-1 que implica sustituci n del amino cido Ser por Phe en el codon 809 dicho sitio se halla conservado en la rata. Esta variante fue identificada en pacientes diab ticos tipo 2. El gen del IRS-1 consta de un solo ex n. Se analiz un fragmento de 281pb del gen IRS-1 que posee 90% de homolog a con el mismo fragmento en humanos. Se purific ADN de leucocitos de un pool de sangre de ratas machos eSS y controles Wistar. Se cuantific y amplific por PCR utilizando un par de primers para amplificar ese mismo fragmento en el gen IRS-1 en humanos. Se us sangre humana como control de amplificaci n. Se emple el m todo de Sanger en la secuenciaci n del fragmento obtenido por PCR previa extracci n del mismo de un gel de agarosa al 2%. Se observ que la rata eSS y las controles mantuvieron la lectura esperada para ese fragmento no encontr ndose la mutaci n investigada. Se descarta la mutaci n Phe-809 como origen de la insulinoresistencia de la rata eSS. PALABRAS CLAVE: mutaci n Phe-809 gen IRS-1 diabetes tipo 2 ratas eSS http://biomed.uninet.edu/2010/n1/daniele.html Electron J Biomed 2010 1:10. Daniele y col. MUTACI N Phe-809... SUMMARY: SEARCH FOR THE PHE-809 MUTATION OF THE INSULIN RECEPTOR SUBSTRATE-1 GENE IN THE DIABETIC ESS RATS Insulin resistance is a pathophysiological condition involved in the development of type 2 diabetes. The gene encoding Insulin Receptor Substrate - 1 (IRS-1) plays a key role in insulin-mediated signal transduction in both human and animal skeletal muscle. Several polymorphisms of IRS-1 gene have been reported to be associated with states of insulin resistance such as obesity and type 2 diabetes. The eSS inbred-line of rats spontaneously develops a type 2 diabetes more severe in males than in females. Using eSS males we investigated the possible presence of the Phe-809 variant in the IRS-1 gene a site conserved in the rat which has Ser for Phe at codon 809. This variant has been found in type 2 diabetes patients. We analyzed a 281pb fragment of the IRS-1 gene which has 90% homology with the same fragment of IRS-1 in humans. Leukocyte DNA was purified from a pool of blood samples of eSS rats. Wistar rats were used as controls. It was quantified and amplified by PCR with an annealing temperature of 50 C using a pair of primers employed to amplify the same fragment in the IRS-1 gene in humans. Human blood was used as control of amplification. We employed the method of Sanger sequencing of the fragment obtained by PCR after extraction of an agarose gel 2%. When reading the radiographs we did not find the mutation. We conclude that eSS rats do not show the Phe-809 mutation in the IRS-1 gene. KEY WORDS: Phe-809 mutation IRS-1 gene type 2 diabetes eSS rats INTRODUCCI N La diabetes tipo 2 est relacionada con defectos en la secreci n de la insulina y con la resistencia a la acci n de dicha hormona dependiendo su expresi n cl nica de la interacci n de factores gen ticos y ambientales1. Tanto en pacientes como en modelos animales la resistencia a la insulina est ntimamente ligada al desarrollo de diabetes tipo 22-3. En los ltimos a os se han identificado en poblaciones humanas mutaciones del gen IRS-1 (sustrato de receptor de insulina) que podr an implicar mayor riesgo gen tico para diabetes tipo 2 al

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