Download rezumatcncsis.pdf

Contents : CNCSIS 1657/2007 ELUCIDAREA NATURII STRUCTURILOR DOUBLE MINUTES (DM) SI A ACTIVITATII TELOMERAZEI IN URMA IRADIERII PRIN TEHNICI DE GENETICA MOLECULARA DIRECTOR LECTOR DR. RADU IRINA Proiectul are ca obiectiv principal studiul efectelor iradierii cu radiatii beta (generate de un accelerator de electroni) asupra genomului murin si uman urmarind elucidarea naturii structurilor cromatiniene double minutes (DM) si determinarea activitatii telomerazei prin tehnici de genetica moleculara. Au fost vizate aspectele de reparare a ADN sub actiunea telomerazei in urma iradierii experimentale. Au fost utilizate doua modele experimentale: modelul in vivo soareci BalbC si modelul in vitro - culturi de celule umane din sange periferic. Verificarea ipotezei conform careia DM reprezinta semnul citologic al amplificarii genelor componentelor telomerazei atat pentru componenta ARN (hTERC) cat si pentru componenta polipeptidica (hTERT) a enzimei a reprezentat obiectivul principal al proiectului si s-a realizat aplicand tehnica FISH. In urma analizelor FISH la nivelul genomului murin nu s-a detectat prezenta componentelor telomerazice in forma amplificata (la 100 nuclei analizati au fost prezente cate doua semnale pentru hTERT si doua semnale pentru hTERC/nucleu interfazic) desi in celule a putut fi detectata o frecventa crescuta de DM. In urma analizelor FISH la nivelul genomului uman pentru componenta ARN a telomerazei nu a fost detectata amplificarea acesteia (au fost prezente la 100 metafaze analizate cate doua semnale pentru hTERC/cromozom respectiv patru semnale/celula diploida). Pentru componenta polipeptidica a telomerazei hTERT in urma analizei a 100 metafaze a fost detectata in proportie de 2% amplificarea hTERT prin prezenta unui extrasemnal fluorescent dispus la nivelul unui cromozom dicentric. Prezenta acestui extrasemnal nu sub forma de DM asa cum era de asteptat ci la nivelul unui cromozom dicentric confirma partial ipoteza conform careia in urma iradierii are loc o amplificare a genelor componentelor telomerazice dar nu sub forma de DM ci eventual ca HSR-uri (DM reintegrat in cromozomi). Determinarea activitatii telomerazei in corelatie cu amplificarea sau neamplificarea genelor componentelor sale sub forma de DM este esentiala si ea s-a realizat in cadrul celui de al doilea obiectiv de baza al proiectului care a fost reprezentat de cuantificarea acestei activitati cuantificare care s-a realizat prin tehnica TRAP assay. Aceasta tehnica aplicata pe ambele modele experimentale (murin si uman) a dat aceleasi rezultate neevidentiind o amplificare a expresiei genelor telomerazei pentru nici una din cele doua componente. Pentru modelul murin rezultatele analizelor moleculare coroborate cu cele de FISH tind sa intareasca concluzia ca in acest caz nu se poate vorbi despre o amplificare a activitatii telomerazice in urma iradierii. Pentru modelul uman insa faptul ca analizele FISH au relevat amplificarea componentei polipeptidice amplificare care nu a fost confirmata insa cu tehnicile actuale ne determina sa ne propunem aprofundarea studiilor aplicand si alte metode mai de finete cum ar fi whole chromosomal painting si RT-PCR. Publicatii: 1. Usurelu D. Radu I. Gavrila L. Timus D. Classic and molecular cytogenetic analysis regarding human reactivity to beta radiation 6th International Conference on Low Dose Radiation Effects on Human Health and Environment Budapesta Ungaria 17-20 oct. 2007 pagina 123 (prezentare orala) 2. Usurelu D. Cimponeriu D. Apostol P. Radu I. Gavrila L. Timus D. Classic and molecular cytogenetic analysis regarding human reactivity to beta radiation (in curs de realizare va fi trimis spre evaluare la o revista cotata ISI in cursul anului 2009). CNCSIS 1657/2007 EXPLAINING THE NATURE OF DOUBLE MINUTES (DM) STRUCTURES AND THE TELOMERASE ACTIVITY AFTER IRRADIATION BY MOLECULAR GENETICS TECHNIQUES DIRECTOR: LECTOR DR. RADU IRINA The main objective of the project is to study the effects of beta radiations (generated by an electron accelerator) upon the murine and human genomes in order to elucidate the nature of the double minutes (DM) chromatin structure and to determine the telomerase activity using molecular genetics methods. Telomerase action upon the DNA repairing processes after the experimental irradiation was taken into account. Two experimental models were used during the project unfolding: the in vivo model BalbC mice and the in vitro model peripheral blood human culture cells. Verifying the hypothesis that DM represents the cytological sign of telomerase components genes amplification for the constitutive RNA (hTERC) as well as for the polypeptide component (hTERT) of the enzyme has represented the main issue of the project and it has been achieved using the FISH method on human model as well as on murine one. Although a high frequency of DM has been detected in the cells no telomerase component in an amplified

INFO HASH : 96c5e49c882c7b6b7f43f64075888949928e7b58

Download now

File Size: 93.3 kb